平板克隆形成實(shí)驗(yàn)

平板克隆形成實(shí)驗(yàn)可以檢測貼壁細(xì)胞的克隆形成能力，克隆形成試驗(yàn)可反映細(xì)胞群體依賴性和增殖能力。一般細(xì)胞在體外增殖六代以 上，其后代形成的細(xì)胞群體稱為細(xì)胞集落或克隆。每個(gè)克隆由單一細(xì)胞而來，含有50個(gè)以上細(xì)胞大小在0.3-1mm之間。通過克隆形成可檢測各種理化因素對細(xì)胞克隆形成能力的影響。

平板克隆形成實(shí)驗(yàn)基本步驟: 

1.取對數(shù)生長期的各組細(xì)胞，分別用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成單個(gè)細(xì)胞并把細(xì)胞縣浮在10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中衡用。

2.將細(xì)胞縣液作梯度倍數(shù)稀釋，每組細(xì)胞分別以每皿50、100、200個(gè)細(xì)胞的梯度密度分別接種合10mL 37"C預(yù)溫培養(yǎng)液的皿中，并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，使細(xì)胞分散均勻。置37C、5% CO₂及飽和溫度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3周。

3.經(jīng)常觀察，當(dāng)培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見的克隆時(shí)，終止培養(yǎng)。棄去上清液，用PBS小心浸洗2次。加甲醛固定細(xì)胞5ml固定15分鐘。然后安固定液加適量GIMSA應(yīng)用染色液染10-30分鐘然后用流水緩慢洗去染色源，空氣干燥。

4.將平皿倒置并疊加一張帶網(wǎng)格的適明膠片，用肉眼直接計(jì)數(shù)克隆或在顯微鏡(低倍鏡)計(jì)數(shù)大于10個(gè)細(xì)胞的克隆數(shù)，再計(jì)算克隆形成率，克隆形成率=克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)。

服務(wù)流程:

1)項(xiàng)目方案的確定，包括目的細(xì)胞、 細(xì)胞處理方式及處理時(shí)間等；

2)細(xì)胞培養(yǎng)；

3)克隆形成實(shí)驗(yàn)；

4)克隆形成實(shí)驗(yàn)圖片及實(shí)驗(yàn)報(bào)告。